關鍵詞：菌種復壯 純種分離 宿主復壯 病毒 寄生微生物 誘變 基因突變 淘汰 菌絲頂端分離 培養(yǎng)基 無菌操作

菌種復壯指通過淘汰衰老、死亡、變異的細胞來挑選具有優(yōu)良性狀的細胞，以此來恢復菌種原有優(yōu)良性狀和活力的過程。常用方法有純種分離法、宿主復壯法、誘變法、淘汰法等。針對不同類型的菌種和復壯目的，可以采用多種方法。

一、純種分離法

純種分離法是目前應用廣泛的菌種復壯方法之一，通過挑取單個性狀優(yōu)良的菌落并進行多次分離培養(yǎng)，以去除混雜在菌種中的衰老、死亡和變異的細胞，從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌種，以達到復壯的目的。

操作步驟如下：

1.準備：無菌環(huán)境下，在超凈工作臺上用無菌接種針或接種環(huán)從需要復壯的菌種中挑取一個性狀優(yōu)良的單菌落。

2.分離：在準備好的培養(yǎng)皿上劃線分離，注意劃線手法，確保成熟后的菌落便于后續(xù)挑選。操作結束后將培養(yǎng)皿放在適宜的環(huán)境中培養(yǎng)。

3.挑選：待菌落生長成熟后，于超凈工作臺上挑選外觀、顏色、形態(tài)優(yōu)良的菌落，進行下一次劃線分離。

4.重復操作：重復數(shù)次上述操作至分離出性狀優(yōu)良的純種菌落。

此外，純種分離法還包括稀釋平板法、涂布平板法等多種方式，可以根據(jù)菌種特性和實驗條件選擇適合的方法來達到復壯菌種的目的。

圖示為劃線分離法

二、宿主復壯法

宿主復壯法適用于病毒、立克次氏體等細胞內(nèi)寄生的微生物。通過將待復壯的菌種接種到昆蟲或植物的宿主細胞內(nèi)，利用宿主細胞內(nèi)復雜的代謝環(huán)境，提高菌種的活力，從而達到復壯的目的。

操作步驟如下：

1.準備：準備昆蟲或植物的宿主細胞，在無菌條件下將宿主細胞接種到適宜的培養(yǎng)基上。

2.寄生：將病毒等需要復壯的微生物接種到宿主細胞內(nèi)，使其寄生并感染宿主細胞。

3.挑選：培養(yǎng)一段時間后，觀察宿主細胞的病變程度，從病變程度嚴重或已病死的宿主細胞內(nèi)分離出典型菌株再次感染健康的宿主細胞。

4. 重復操作：重復上述操作至菌種活力得到提高。

圖示為病毒寄生宿主細胞

三、誘變法

通過物理或化學因素使菌種發(fā)生基因突變，從而篩選出具有優(yōu)良性狀的菌株。誘變法存在一定的風險，可能會導致菌種發(fā)生不可逆的突變，使用時需注意誘變劑的劑量或輻射時間。

操作步驟如下：

1.準備：準備好需要復壯的菌種培養(yǎng)基，選擇合適的誘變劑，如紫外線、抗生素等。

2.誘變：使用誘變劑處理培養(yǎng)基，使菌種發(fā)生基因突變。

3.挑選：將培養(yǎng)基放在適宜的環(huán)境中至培養(yǎng)結束，無菌環(huán)境下挑選出具有優(yōu)良性狀的突變株進行復壯。

圖示為用紫外線處理培養(yǎng)皿

四、淘汰法

淘汰法通過對衰退的菌種進行處理，如高溫、低溫的培養(yǎng)環(huán)境，低營養(yǎng)的培養(yǎng)基等，淘汰菌種中的衰老、死亡和變異的細胞，從而篩選出適應力強、有活力的細胞。淘汰法可以有效去除衰退個體，增強菌種的優(yōu)良性狀。

操作步驟如下：

1.準備：無菌環(huán)境下，將待復壯的菌種接種到低營養(yǎng)的培養(yǎng)基上，或接種到正常的培養(yǎng)基上放在高溫或低溫環(huán)境中培養(yǎng)。

2.挑選：培養(yǎng)周期結束后，在超凈工作臺上挑選出適應力強、有活力的菌落進行下一步的復壯操作。

圖示為通過調(diào)節(jié)溫度改變培養(yǎng)環(huán)境

五、其他方法

1.菌絲頂端分離：無菌環(huán)境下挑取健壯菌絲體的頂端部分進行純化培養(yǎng)，以恢復菌種原有的優(yōu)良性狀。此方法適用于不產(chǎn)孢子的絲狀菌。

2.適當更換培養(yǎng)基：在菌種傳代培養(yǎng)中適當改變培養(yǎng)基成分，以刺激菌絲生長，提高菌種活力。

3.定期進行菌種分離：對生產(chǎn)中應用的菌種每1-2年進行一次分離復壯，以保持菌種的優(yōu)良性狀和活力。

六、注意事項

1.復壯前需對菌種進行鑒定，保證菌種的純度。

2.復壯操作過程中要注意無菌操作，避免培養(yǎng)基或菌種被雜菌污染，保證菌種正常生長。

3.應對復壯后的菌種進行性能評價，確保其具有穩(wěn)定的優(yōu)良性狀。

綜上所述，菌種復壯是一個綜合性的過程，需要根據(jù)具體情況選擇合適的方法并按操作規(guī)范嚴格執(zhí)行。通過菌種復壯，可以恢復菌種原有的生命活力，提高菌種的生長和代謝速度，為發(fā)酵生產(chǎn)、科學研究等提供具有優(yōu)良性狀的菌種。